云南马帮文化博物馆坐落在云南省祥云县南驿古代驿道的中段，坐南朝北，同云南驿（明清驿站）和二战中印缅战区交通史纪念馆隔一丈宽的青石板古道相望。
博物馆本身就是古镇的大马店，占地550平方米，为土木结构两层三进带后院的古建筑，建筑面积约一千平方米，布局完整，是云南省现存完好最大的马店。
云南马帮文化博物馆采用国际流行的开放式布置展览，一改传统博物馆橱窗加文字布展的生涩乏味，可以零距离的体验马帮运输时代的生活方式。桌上的账簿随风翻卷，仿佛花白胡子的账房老先生就在附近；客房床上的被褥还在凌乱，就像马锅头刚刚离去；几个院子静静的，只有在马槽吃草的骡马悄悄打了个响鼻，抬头瞪着被吓一跳的访客。不经意间看到墙上几首《赶马调》，心境才从大马店回到了博物馆。
一个一百多前的大马店——账房、开亮（露营）、马厩、客房、茶房，原汁原味的场景复原；数百件驮架、马鞍、马镫、头饰、货物、工具，地地道道的马帮物品； 云南驿古镇也是一个原生态的马帮文化博物馆。约两公里的茶马古道全部用青石板铺砌而成，千百年的人走马踏，早已经磨得光鉴照人，很容易找到几个深深的马蹄印。古道两侧数不清的老房子一家接着一家，一门一窗一铺台的样式，一看便知早年的商业繁荣。随便一打听，十有八九的人家都经营过马店，或客栈，或商号。也不知当年云南驿有多少马帮来来往往。
